中国中药杂志

2016, v.41(06) 1021-1026

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灵芝DNA甲基转移酶(GlMET1)基因克隆及原核表达诱导分析
Cloning and prokaryotic expression analysis of DNA methyltransferas 1 ( MET1) in Ganoderma lucidum

查良平;王亚君;刘爽;赵玉洋;袁媛;黄璐琦;

摘要(Abstract):

DNA甲基转移酶是DNA甲基化过程中最关键的酶,对生物体内的基因表达调节起着重要作用。研究根据灵芝转录组数据,通过全基因合成首次克隆得到灵芝DNA甲基转移酶Gl MET1,Genbank注册号为KU239998,并对其基因特性和空间结构进行全面的生物信息学分析。原核表达诱导分析表明p ET28a(+)-Gl MET1重组质粒在BL21(DE3)中能成功表达出目的蛋白,对其诱导条件进行优化,得出蛋白最合适的表达条件为:诱导温度为16℃,重组菌生长2.5 h(A600为0.8),IPTG浓度为0.2 mmol·L~(-1),诱导时间为12 h。实时荧光定量PCR结果表明不同品种灵芝Gl MET1的基因表达水平均有明显差异,且Gl MET1在成熟期的表达水平均低于幼年期,说明Gl MET1表达量随着灵芝的生长发育呈下降趋势。该研究结果为深入研究DNA甲基转移酶蛋白的作用机制奠定了基础。

关键词(KeyWords): 灵芝;甲基化;甲基转移酶;基因克隆;原核表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家杰出青年科学基金项目(81325023);; 国家高技术研究发展计划(863)项目(SS2014AA022201)

作者(Author): 查良平;王亚君;刘爽;赵玉洋;袁媛;黄璐琦;

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