中国中药杂志

2014, v.39(09) 1569-1573

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利用Gateway克隆技术构建丹参SmNAC1转录因子的RNAi表达载体
Construction of RNAi vectors for SmNAC1 transcription factors of Salvia miltiorrhiza using Gateway cloning technology

赵容;荣齐仙;刘玉忠;申业;黄璐琦;

摘要(Abstract):

NAC转录因子参与植物生长发育和对生物和非生物胁迫的应答反应,利用Gateway克隆技术构建丹参NAC转录因子的RNAi植物表达载体,以便进一步研究丹参NAC转录因子的功能。根据Gateway技术要求,设计含有attB接头的引物,使用NEB的Phusion超保真聚合酶,通过PCR方法,扩增SmNAC1基因的特异性片段。通过BP重组反应,将带有attB接头的PCR产物克隆到入门载体pENTR/SD/D-TOPO上,再通过LR重组反应,利用入门载体上的SmNACi特异性基因片断克隆到植物表达载体pK7GWIWG2D上。实验结果表明Gateway载体的构建方法能够高效、快速地将目的基因克隆到表达载体上,为植物基因转化提供基础。

关键词(KeyWords): RNAi;Gateway载体;BP和LR反应

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金项目(81173490,81130070)

作者(Author): 赵容;荣齐仙;刘玉忠;申业;黄璐琦;

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