中国中药杂志

2012, v.37(24) 3712-3716

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丹参SmJAZ1蛋白原核表达及条件优化
Optimizing expression of recombinant jasmonate ZIM-domain protein from Salvia miltiorrhiza

张利华;吴文燕;黄璐琦;申业;

摘要(Abstract):

目的:在前期克隆丹参SmJAZ1基因的cDNA全长基础上,为研究丹参SmJAZ蛋白的功能,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达丹参SmJAZ1蛋白,并对其表达条件进行优化。方法:利用分子克隆的方法将丹参JAZ1基因构建到原核表达载体pET32a上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)宿主菌中进行诱导表达。结果:对影响重组蛋白表达的4个因素,即诱导温度、诱导时间、IPTG浓度、及IPTG添加时间进行优化,确定丹参SmJAZ1重组蛋白最适表达条件。IPTG浓度对目的蛋白的表达量没有显著影响;随诱导时间和诱导温度增加,SmJAZ蛋白的表达量增加;而IPTG添加时间对蛋白的表达量有明显影响。结论:丹参JAZ1蛋白在30℃温度条件下,重组菌生长2 h(A600=0.9),加入0.1 mmol.L-1浓度的IPTG,诱导20 h后,表达条件最合适。

关键词(KeyWords): 丹参;JAZ1;原核表达;条件优化

Abstract:

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基金项目(Foundation):

作者(Author): 张利华;吴文燕;黄璐琦;申业;

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